WWW.UK.X-PDF.RU

БЕЗКОШТОВНА ЕЛЕКТРОННА БІБЛІОТЕКА - Книги, видання, автореферати

 
<< HOME
CONTACTS




Продажа зелёных и сухих саженцев столовых сортов Винограда (по Украине)
Тел.: (050)697-98-00, (067)176-69-25, (063)846-28-10
Розовые сорта
Белые сорта
Чёрные сорта
Вегетирующие зелёные саженцы

Продажа зелёных и сухих саженцев столовых сортов Винограда (по Украине)
Тел.: (050)697-98-00, (067)176-69-25, (063)846-28-10
Розовые сорта
Белые сорта
Чёрные сорта
Вегетирующие зелёные саженцы
Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ «Порядок забору, транспортування та зберігання матеріалу для дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції» Методичні рекомендації «Порядок забору, ...»

-- [ Страница 1 ] --

ЗАТВЕРДЖЕНО

Наказ Міністерства

охорони здоров'я України

від 30.07.2013 № 662

МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ

«Порядок забору, транспортування та зберігання матеріалу

для дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції»

Методичні рекомендації «Порядок забору, транспортування та зберігання

матеріалу для дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції» (далі –

МР) встановлюють загальні вимоги до організації забору, первинної обробки, зберігання та транспортування матеріалу для досліджень методом полімеразної ланцюгової реакції (далі - ПЛР).

МР поширюються на лабораторії (відділи, відділення) мікробіологічного профілю установ та закладів охорони здоров’я, закладів науки та освіти та інші лабораторії незалежно від їх підпорядкування та форм власності, що проводять молекулярно-біологічні дослідження з біологічними патогенними агентами (далі – БПА) I-IV груп патогенності або матеріалом, підозрілим на їх вміст.

1. Загальні правила забору та підготовки матеріалу для дослідження методом ПЛР Забір матеріалу повинен здійснювати кваліфікований спеціаліст, якій систематично проходить інструктаж з правил забору, зберігання та транспортування біологічного матеріалу.

Забір зразків клінічного матеріалу (далі – зразки) для діагностики інфекційної патології у пацієнта по можливості проводять у період загострення в нього інфекції.

Для первинної діагностики захворювань та скринінгових досліджень слід за 3-5 днів до взяття матеріалу припинити прийняття лікарських препаратів та лікувальних процедур. При неможливості відміни, забір здійснюють в період найменшої концентрації препарату (перед введенням наступної його дози).

Зразки відбирають, дотримуючись вимог цих методичних вказівок (далі – МВ), якщо в інструкції про застосування конкретних тест-систем не вказано інакше, стерильними одноразовими інструментами в стерильні одноразові флакони, пробірки тощо. Працюють в одноразових гумових рукавичках, які змінюють після кожного пацієнта та виду матеріалу.

Зразки відбирають в пробірки або флакони з транспортним середовищем, що надається фірмою-виробником тест-систем (у випадках, коли використання транспортного середовища є необхідним). Не рекомендується використання транспортного середовища інших фірм-виробників.

Пробірки або флакони, в які було відібрано зразок, щільно закривають.

При цьому не слід торкатися внутрішніх поверхонь посуду та кришок.

Кожна пробірка, флакон тощо повинні бути промарковані і супроводжуватись направленням до лабораторії відповідно до форм медичної документації, затверджених наказами МОЗ України.

Перед забором епітеліальних клітин слизових оболонок необхідно видалити з їх поверхні стерильним тампоном слиз і гній, оскільки при зберіганні і транспортуванні клінічного матеріалу, присутність слизу та гною в значній кількості сприяє деградації ДНК і може впливати на якість та ефективність отримання НК.

При перенесенні зразка з пробірок, флаконів тощо в інші, слід використовувати тільки окремі одноразові стерильні наконечники з фільтром.

З метою попередження контамінації зразків при внесенні біоматеріалу, взятого у пацієнта зондом (тампоном, цервікальною щіточкою), в пробірку з транспортним середовищем, необхідно дотримуватись правил асептики.

При роботі з клінічним матеріалом, відкриваючи пробірки, флакони тощо, не можна здійснювати різких рухів і допускати розбризкування і розпліскування, які можуть призвести до контамінації зразків і робочих поверхонь.

Пробірки з транспортним середовищем для ПЛР-дослідження повинні зберігатися відповідно до умов, вказаних виробником середовища.

Суворо дотримуватись правил зберігання і транспортування зразків.

Охолоджуючі елементи перед транспортуванням зразків заморожувати до температури, вказаної виробником. Якщо інформація щодо температури їх заморожування відсутня – при температурі -20 °С.

2. Матеріали та обладнання, необхідні для забору і попередньої обробки матеріалу для дослідження методом ПЛР

Матеріали:

1. Одноразові поліпропіленові мікроцентрифужні пробірки з кришками, що загвинчуються або щільно закриваються, об’ємом 1,5 мл.

2. Одноразові поліпропіленові пробірки з кришками, що загвинчуються, об’ємом 50 мл.

3. Мікроцентрифужні пробірки із защіпкою 1,5 мл, градуйовані (пробірки типу «епендорф» об'ємом 1,5 мл).

4. Пластиковий контейнер об’ємом 60 мл, 30 мл з ложкою.

5. Вакуумні пробірки з ЕДТА-КЗ, 2,0-6,0 мл 13x100 мм.

6. Зонд гінекологічний універсальний (полімерний ворсистий для взяття матеріалу з уретри і цервікального каналу).

7. Цитощітка цервікальна.

8. Тампон із віскози або дакрону на пластиковій основі.

9. Одноразові наконечники з фільтром для піпеток змінного об’єму до 200 і до 1000 мкл.

10. Штативи для пробірок, мікропробірок, флаконів та штативи для наконечників.

11. Ємності для дезінфікуючих розчинів.

12. Одноразові халати і одноразові гумові (без пудри) рукавички.

13. Стерильні компостери (пробійники) з діаметром отвору 6 мм.

Обладнання:

1. Центрифуга клінічна.

2. Мікроцентрифуга 12-16 тис. g для мікроцентрифужних пробірок об’ємом 1,5 мл.

3. Гомогенізатор.

4. Холодильники, що забезпечують наступні режими: +2 – +8 °С, -18 – -20 °С.

5. Морозильна камера -70 °С.

Перед відбором клінічного матеріалу, особливо при застосуванні інвазивних методів, враховується можливий ризик для пацієнта і користь, а також доцільність відбору саме даного виду біоматеріалу для цілей верифікації клінічного діагнозу і оцінки лікувальних заходів, що проводяться або плануються. Наприклад, ДНК деяких збудників неінформативно виявляти в крові (Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorhoeae). Також неінформативним буде забір матеріалу в період ремісії (для інфекцій з періодами загострень і ремісій).

Слід пам’ятати, що вибір клінічного матеріалу для дослідження визначається найбільш ймовірним місцем локалізації збудника. Наприклад, при хронічному сальпінгіті (запаленні маткових труб) хламідії можуть бути не виявлені в області шийки матки.

Найбільш інформативний матеріал для виявлення певних збудників інфекційних хвороб, з урахуванням їх біологічних властивостей та тропності до певних тканин, приведений у додатку 1.

3. Порядок забору, транспортування, зберігання та первинної обробки біологічного матеріалу

3.1. Кров (плазма) Зразки крові (плазми) використовують як для якісних, так і для кількісних видів досліджень. Зразки сироватки крові слід використовувати тільки для якісних досліджень. Забір крові слід проводити натщесерце або не раніше, ніж через 3 години після прийому їжі, з ліктьової вени одноразовою голкою (діаметр 0,8-1,1 мм) за допомогою вакуумної системи забору крові (пробірка з кришкою бузкового кольору, яка містить EDTA-К3 ).

Після взяття крові пробірку декілька разів плавно перевертають догори дном, щоб кров в пробірці ретельно перемішалася з антикоагулянтом, інакше кров згорнеться і виділення ДНК/РНК стане неможливим! Після перемішування пробірку поміщають у штатив.

Використовувати гепарин у якості антикоагулянту категорично заборонено, оскільки він є інгібітором ПЛР!

Для отримання сироватки крові слід використовувати пробірки без антикоагулянту.

Сухі краплини крові (СКК), висушені на паперовій картці типу 90 (Whatman, Німеччина) або аналогічній. Процедуру приготування сухих плям крові слід проводити відповідно до рекомендацій ВООЗ (WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16 Рекомендації по використанню ВІЛ тестових технологій в області епіднагляду, 2009). Для кожного пацієнта має бути використана одна картка.

Процедура нанесення крові на папір. На кожне коло картки наносять одну краплю крові (близько 50 мкл). Під час нанесення крові на папір, необхідно щоб крапля зайняла більшу частину кола. Правильно заповненою вважається та картка, у якої всі кола повністю заповнені кров'ю. Після нанесення крові на картку, її необхідно просушити при температурі від +18 – +25 °С протягом 4-12 год. (уникати прямих сонячних променів). Для транспортування або зберігання картки упаковують в пакети типу zip-lock (пакети, що захищають від підвищеної вологості) разом з осушувачами (із розрахунку 1 шт. осушувача на 1 СКК) і індикатором вологості (1 шт. на пакет). В один пакет може бути упаковано до 10 карток СКК.


Купить саженцы и черенки винограда

Более 140 сортов столового винограда.


Умови зберігання і транспортування матеріалу:

Зразки цільної крові:

- при температурі +20 – +25 °С – впродовж 2 год.;

- при температурі +2 – +8 °С – впродовж 6 год. для кількісного і протягом 12 год. для якісного визначення НК.

При неможливості доставки зразків цільної крові на тестування впродовж вказаного терміну, перевага віддається плазмі або сироватці. Необхідно отримати ці компоненти крові і доставити їх в терміни вказані нижче.

Неприпустимо заморожування зразків цільної крові!

Висушені і упаковані картки при низьких показниках вологості можуть зберігатися при температурі +2– +8 °С впродовж 6 місяців.

Зразки плазми та сироватки:

- при температурі +2 – +8 °С – впродовж 5 діб;

- при температурі -16 – -20 °С – впродовж року;

- при температурі -70 °С – тривало.

Допускається лише однократне заморожування-розморожування матеріалу, тому зразки плазми або сироватки для тривалого зберігання розділяють на невеликі (0,1-0,2 мл) порції в окремі стерильні пробірки об’ємом 1,5 мл.

Транспортування матеріалу здійснюють у спеціальному термоконтейнері з охолоджуючими елементами, дотримуючись «холодового ланцюга».

Матеріал потребує попередньої обробки.

Плазма крові Плазму крові отримують шляхом центрифугування пробірок з цільною кров’ю при 800-1600 g впродовж 20 хв. при кімнатній температурі (18-22°С).

Перерахунок відносної сили центрифугування (g) у швидкість центрифугування (об/хв.) наведений у додатку 4. Відбирають плазму в кількості не менше 1 мл окремими наконечниками з фільтром у стерильні пробірки типу «Еппендорф»

об’ємом 1,5-2,0 мл.

Клітини крові Клітини крові (лейкоцитарну фракцію цільної крові, лейкоцитарну плівку) для виявлення лейкотропних вірусів (CMV, EBV, HHV6 та інших), а також бактерій та внутрішньоклітинних паразитів відбирають після центрифугування цільної крові і видалення плазми. Використовуючи наконечник з фільтром акуратно збирають лейкоцитарну масу з поверхні осаду клітин в об’ємі 0,2 мл і переносять в стерильну пробірку типу «Еппендорф» об’ємом 1,5-2,0 мл.

Сироватка крові*

Сироватку отримують з крові, відібраної в одноразові пробірки без антикоагулянту. Для цього кров витримують при кімнатній температурі протягом 30 хв. до повного утворення згустку або поміщають у термостат при 37 °С на 15 хв. Після цього центрифугують при 1200-2000 g впродовж 15 хв.

Переносять сироватку окремими наконечниками з фільтром у стерильні пробірки типу «Еппендорф» об’ємом 1,5-2,0 мл.

Сироватка не повинна бути гемолізованою!

Примітка: * Сироватку допускається використовувати тільки для якісного виявлення НК вірусів гепатитів у випадку неможливості отримати плазму; важливо пам’ятати, що при згортанні крові частина НК вірусів (ВІЛ, HCV, HBV) залишається у кров’яному згустку.

Картки з сухими краплинами крові (СКК). Взяти стерильні компостери (пробійники) з діаметром отвору 6 мм. Підготувати пробірки типу "Еппендорф" об’ємом 1,5-2,0 мл. Використовуючи для кожного зразка окремий пробійник, вибити у відповідні пробірки кола з сухими краплинами крові. Кількість матеріалу, необхідного для дослідження, повинна бути вказана в інструкції до тест-системи.

Виділення НК з сухих плям проводять відповідно до рекомендації виробника карток або тест-систем для екстракції НК якщо таке передбачено.

3.2. Клінічний матеріал з урогенітального тракту жінок Матеріал для дослідження відбирають у жінок перед менструацією або через 1-2 дні після її завершення.

Матеріал відбирають до початку проведення мануального обстеження!

За наявності ерозії шийки матки матеріал слід відбирати на межі здорової і зміненої тканин. Перед обстеженням на наявність збудників захворювань, що передаються статевим шляхом (ЗПСШ), за 12 год. до забору матеріалу не рекомендується проводити туалет статевих органів, їх обробку мазями, присипками і т. ін., виключити впродовж 3 днів статеві контакти та використання вагінальних свічок, мазей, тампонів, не слід спринцюватися і приймати ванну.

Відбирати матеріал для скринінгового дослідження необхідно з кількох різних точок. Матеріалом може бути епітелій цервікального каналу (ендоцервікс) або вагінальні виділення. При необхідності матеріал для дослідження (зішкріб) слід брати з уретри і ерозивно-виразкових уражень.

Відібраний матеріал з різних місць локалізації від одного пацієнта можна поміщати в одну пробірку з транспортним середовищем.

Для діагностики запальних захворювань (цервіцит, вагініт, уретрит), бактеріального вагінозу, скринінгового HPV-тестування матеріал з кожного місця локалізації слід забирати в окрему пробірку. Забір матеріалу проводять окремими для кожного із місць локалізації одноразовими стерильними цитощітками або універсальними зондами.

Для контролю ефективності лікування забір матеріалу здійснюють не раніше, ніж через 4-6 тижнів після завершення терапії.

Вибір клінічного матеріалу залежить від діагностичної задачі (додаток 2).

Умови зберігання і транспортування матеріалу залежать від рекомендацій виробника транспортних середовищ. Якщо матеріал був заморожений, то допускається однократне заморожування-розморожування матеріалу. Транспортування матеріалу здійснюють в спеціальному термоконтейнері з охолоджуючими елементами, дотримуючись "холодового ланцюга".

Умови зберігання і транспортування матеріалу можуть коригуватися, зважаючи на інструкцію до транспортного середовища і набору реагентів для виділення і очищення НК.

3.2.1. Зішкріб епітелію з цервікального каналу Доступ до цервікального каналу забезпечують за допомогою одноразового або багаторазового стерильного гінекологічного дзеркала. Забір матеріалу проводять за допомогою цервікальної цитощітки у пробірку із спеціальним транспортним середовищем з муколітиком об’ємом 2,0 мл.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
Похожие работы:

«Збірник наукових №3 (80) Серія: Економічні науки праць ВНАУ 2013 УДК 330.111.6:658.821 ББК 65 Гуцаленко Оксана Олександрівна, асистент Кафедра організації обліку та звітності Вінницький національний аграрний університет ПРИРОДНО-ЕКОНОМІЧНИЙ ПОТЕНЦІАЛ ЯК ФАКТОР ФОРМУВАННЯ ПРОПОЗИЦІЇ ОРГАНІЧНОЇ ПРОДУКЦІЇ В УКРАЇНІ В статті висвітлено основні складові та проведено аналіз природно-економічного потенціалу для формування пропозиції органічної продукції сільського господарства в Україні. Визначено,...»

«МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ МІКРОБІОЛОГІЯ ЖИРІВ ТА ЖИРОЗАМІННИКІВ МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ до вивчення дисципліни та виконання лабораторних робіт для студентів спеціальності 6.091700 Технологія жирів та жирозамінників (ТЖ-ІV) напряму 0917 “Харчова технологія та інженерія” денної форми навчання Всі цитати, цифровий та факСХВАЛЕНО тичний матеріал, бібліографічні на засіданні кафедри відомості перевірені. біотехнології мікробного Написання одиниць...»

«Т.М. Васютіна, Т.Є. Буяло РОБОЧИЙ ЗОШИТ З ПРИРОДОЗНАВСТВА 5 клас Схвалено для використання у загальноосвітніх навчальних закладах комісією з біології та екології Науково-методичної ради з питань освіти Міністерства освіти і науки України (протокол № 5 від 26.07.2013 р.) ТЕРНОПІЛЬ НАВЧАЛЬНА КНИГА – БОГДАН Рецензенти: УДК 502(075.3) ББК 20.18я72 кандидат педагогічних наук, доцент Кобернік С.Г. В20 учитель вищої категорії, вчитель-методист Крилова Н.В. Схвалено для використання у загальноосвітніх...»

«МІЖРЕГІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ УПРАВЛІННЯ ПЕРСОНАЛОМ методичні рекомендації щодо забезпечення самостійної роботи студентів здисципліни “маркетинг медичних і фармацевтичних послуг” (дляспеціалістів) Київ ДП «Видавничий дім «Персонал» Підготовлено доцентом кафедри медичного та екологічного менеджменту Н. І. Фетісовою Затверджено на засіданні кафедри менеджменту (протокол № 7 від 19.02.08) Схвалено Вченою радою Міжрегіональної Академії управління персоналом фетісова н. і. Методичні рекомендації щодо...»

«УДК 630*174.753 Доц. Ю.М. Дебринюк, канд. с.-г. наук – УкрДЛТУ ДО ПИТАННЯ ВИРОЩУВАННЯ ЛІСОВИХ КУЛЬТУР ЗА УЧАСТЮ МОДРИНИ ЄВРОПЕЙСЬКОЇ У ЗАХІДНОМУ РЕГІОНІ УКРАЇНИ На підставі досліджень росту і продуктивності 202-ох 18-160-річних чистих і змішаних насаджень за участю модрини за період 1986-2000 рр. рекомендується застосування схем і способів змішування при створенні лісових культур за участю модрини європейської. У статті дискутується проблема, положення якої стали об'єктом критичних зауважень...»

«МІЖРЕГІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ УПРАВЛІННЯ ПЕРСОНАЛОМ НАВЧАЛЬНА ПРОГРАМА дисципліни “ОСНОВИ АГРОБІЗНЕСУ” (для бакалаврів і спеціалістів) Київ 200 Підготовлено кандидатом біологічних наук, доцентом З. Г. Гамкалом Затверджено на засіданні кафедри управління бізнесом (протокол № 14 від 15.03.04) Схвалено Вченою радою Міжрегіональної Академії управління персоналом Гамкало З. Г. Навчальна програма дисципліни “Основи агробізнесу” (для бакалаврів і спеціалістів). — К.: МАУП, 2004. — 20 с. Навчальна програма...»

«Міністерство освіти і науки України Вінницький національний технічний університет ФІЗИЧНІ ОСНОВИ БІОМЕДИЧНОЇ ОПТИКИ Монографія Вінниця ВНТУ УДК [535+681.7]:615.47 ББК 22.34:5 Ф48 Автори: С. В. Павлов, В. П. Кожем’яко, П. Ф. Колісник, Т. І. Козловська, В. П. Думенко Рекомендовано до друку Вченою радою Вінницького національного технічного університету Міністерства освіти і науки України (протокол № 5 від 24 грудня 2009 року). Рецензенти: Л. І. Тимченко, доктор технічних наук, професор; С. М....»

«МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ, МОЛОДІ ТА СПОРТУ УКРАЇНИ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ ЗАТВЕРДЖУЮ Ректор _ проф. Іванов С.В. «»_ 2011 р. ВИКОРИСТАННЯ МАТЕМАТИЧНИХ МОДЕЛЕЙ ТЕХНОЛОГІЧНИХ ПРОЦЕСІВ У РОЗРАХУНКАХ ОБЛАДНАННЯ МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ до вивчення дисципліни і проведення практичних занять для студентів спеціальностей 7.05050314, 8.05050314 «Обладнання фармацевтичних та біотехнологічних виробництв» денної форми навчання Реєстраційний номер СХВАЛЕНО електронних методичних на...»

«Педагогіка і психологія професійної освіти № 3 2012. УДК 377.1:372.832 Василь Онищенко НАУКОВО-МЕТОДОЛОГІЧНІ ПІДХОДИ ДО СТВОРЕННЯ ІНТЕГРОВАНОГО КУРСУ “ЛЮДИНА І СУСПІЛЬСТВО” ДЛЯ УЧНІВ ПТНЗ Дослідженню проблеми створення підручників із суспільно-гуманітарних дисциплін для загальноосвітньої школи, зокрема для учнів ПТНЗ, присвячена стаття Р. Арцишевського “Каталізатор духовності (концептуальні засади створення підручників соціально-гуманітарного циклу)” [1, c. 3]. У 2001 р. під його керівництвом...»

«Національна академія внутрішніх справ Бюлетень нових надходжень загальної бібліотеки НАВС № 10 за 2012р (жовтень) Київ 2012 Біологічні науки Е Грицик В. Г858 Екологія довкілля. Охорона природи: навч. посібник/ В.Грицик, Ю.Канарський, Я.Бедрій; МОН України.Київ: Кондор, 2009.290с.грн. Транспорт О Загальні відомості щодо фарбування кузовів легкових автомобілів. З-140 Експрес-аналіз лакофарбового покриття під час проведення комплексного дослідження транспортних засобів: Довідковий посібник / МВС...»




Продажа зелёных и сухих саженцев столовых сортов Винограда (по Украине)
Тел.: (050)697-98-00, (067)176-69-25, (063)846-28-10
Розовые сорта
Белые сорта
Чёрные сорта
Вегетирующие зелёные саженцы


 
2013 www.uk.x-pdf.ru - «Безкоштовна електронна бібліотека»