«НАЦІОНАЛЬНИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИ _ ЯЙЦЯ ХАРЧОВІ, ПРОДУКТИ ЯЄЧНІ Методи визначання мікробіологічних показників ДСТУ Видання офіційне Київ ДЕРЖСПОЖИВСТАНДАРТ УКРАЇНИ ДСТУ ПЕРЕДМОВА 1. ...»
Проект ДСТУ
www.avian.org.ua
НАЦІОНАЛЬНИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИ
_________________________________________________________________
ЯЙЦЯ ХАРЧОВІ, ПРОДУКТИ ЯЄЧНІ
Методи визначання мікробіологічних показників
ДСТУ
Видання офіційне
Київ
ДЕРЖСПОЖИВСТАНДАРТ УКРАЇНИ
ДСТУ
ПЕРЕДМОВА
1. РОЗРОБЛЕНО: Інститут птахівництва Української академії аграрних наук РОЗРОБНИКИ: Д. Гриценко (керівник розробки); В. Д'яченко, Г. Єрмішко; В.Ковач; Л. Наливайко, доктор вет. наук
2. ПРИЙНЯТО ТА НАДАНО ЧИННОСТІ: наказ Держспоживстандарту України від „___” __________ 200__ р. № ____
3. УВЕДЕНО ВПЕРШЕ __________________________________________________________________
Право власності на цей документ належить державі.
Відтворювати, тиражувати і розповсюджувати його повністю чи частково на будь-яких носіях інформації без офіційного дозволу заборонено.
Стосовно врегулювання прав власності звертатись до Держспоживстандарту України Держспоживстандарт України, 200 II ДСТУ ЗМІСТ С.
1 Сфера застосування
2 Нормативні посилання
3 Терміни та визначення понять
4 Відбирання і готування проб
5 Методи досліджування…
6 Вимоги щодо безпеки
7 Вимоги щодо охорони довкілля
Додаток А. Поживні середовища і реактиви………………………… Додаток Б. Методика фарбування мазків за методом Грама………… Додаток В. Бібліографія………………………………………………… Пояснювальна записка ………………………………………………… 39
Table eggs, eggs products Methods of determination of microbiological indices __________________________________________________________________
Чинний від____________
1 СФЕРА ЗАСТОСУВАННЯ
1.1 Цей стандарт встановлює вимоги до методів мікробіологічного контролювання харчових яєць, рідких та сухих яєчних продуктів, виготовлених із яєць сільськогосподарської птиці і призначених для харчових цілей:
- визначання кількості мезофільних аеробних і факультативноанаеробних мікроорганізмів;
- визначання бактерій групи кишкових паличок поліморфних бактерій;
- виявляння бактерій роду Salmonellae;
- виявляння бактерій роду Proteus;
- виявляння бактерій роду Staphylococcus aureus.
1.2 Вимоги стандарту є рекомендованими для державних лабораторій ветеринарної медицини, лабораторій птахівницьких підприємств, які працюють за стандартизованими методиками щодо контролювання мікробіологічних показників харчових яєць та яєчних продуктів.
1.3 Вимоги щодо безпеки визначання методів мікробіологічного контролю яєчних продуктів та охорони довкілля викладено в розділах 6 та 7 цього стандарту.Обычный ___________________________________________________________________
Видання офіційне 4 ДСТУ
2 НОРМАТИВНІ ПОСИЛАННЯ
У цьому стандарті є посилання на такі нормативні документи:
ДСТУ 2636-94 Загальна мікробіологія. Терміни та визначення ДСТУ 4221–2003 Спирт етиловий ректифікований. Технічні умови.
ДСТУ 5028:2008 Яйця курячі харчові. Технічні умови ДСТУ ГОСТ ИСО 14644-1:2004 Чисті приміщення і пов’язані з ними контрольовані середовища. Частина 1. Класифікація чистоти повітря ДСТУ ISO 13683:2003 Стерилізація виробів медичної призначеності Вимоги до валідації і поточного контролювання Стерилізація вологим теплом у медичних установах ДСТУ ISO/TS 11133-1:2005 Мікробіологія харчових продуктів та кормів для тварин. Настанови щодо готування та виробництва поживних середовищ.
Частина 1. Загальні настанови щодо виготовлення поживних середовищ гарантованої якості в лабораторії ГОСТ 12.
1.004-91 ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования (ССБП. Пожежна безпека. Загальні вимоги) ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны ГОСТ 12.1.008-76 ССБТ. Биологическая безопасность. Общие требования (ССБП. Біологічна безпека. Загальні вимоги) ГОСТ 17.2.3.01-86 Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов (Охорона природи. Атмосфера. Правила контролю якості повітря населених пунктів) ГОСТ 171-81 Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия (Дріжджі хлібопекарські пресовані. Технічні умови) ГОСТ 245-76 Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный.
Технические условия (Натрій фосфорнокислий однозаміщений 2-водний.
Технічні умови) ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия (Посуд мірний лабораторний скляний. Циліндри, мензурки, колби, пробірки. Технічні умови) ГОСТ 2874-82 Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за ДСТУ качеством (Вода питна. Гігієнічні вимоги і контроль за якістю) ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия (Кислота соляна.
Технічні умови) ГОСТ 4159-79 Йод. Технические условия (Йод. Технічні умови) ГОСТ 4198–75 Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия (Калій фосфорнокислий однозаміщений. Технічні умови) ГОСТ 4208-72 Реактивы. Соль закиси железа и аммония двойная сернокислая (соль Мора). Технические условия (Реактиви. Сіль закису заліза та амонію подвійна сірчанокисла (сіль Мора) ГОСТ 4209-77 Магний хлористый 6-водный. Технические условия (Магній хлористий 6-водний. Технічні умови) ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия (Реактиви. Калій йодистий. Технічні умови) ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия (Натрій хлористий. Технічні умови) ГОСТ 5833-75 Сахароза. Технические условия (Сахароза. Технічні умови) ГОСТ 6038-79 D-глюкоза. Технические условия (D-глюкоза. Технічні умови) ГОСТ 6417-78 Фенол. Технические условия (Фенол. Технічні умови) ГОСТ 6691-77 Карбамид. Технические условия (Карбамід. Технічні умови) ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия (Вода дистильована. Технічні умови) ГОСТ 6824-96 Глицерин дистиллированный. Общие технические условия (Гліцерин дистильований. Загальні технічні умови) ГОСТ 8074-82 Микроскопы инструментальные. Типы, основные параметры и размеры. Технические требования (Мікроскопи інструментальні.
Типи, основні параметри та розміри. Технічні вимоги) ГОСТ 8253-79 Мел химически осажденный. Технические условия (Крейда хімічно осаджена. Технічні умови) ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия (Скло предметне для мікропрепаратів. Технічні умови) ДСТУ ГОСТ 11078 Натр їдкий очищенный. Технические условия (Натрій їдкий очищений. Технічні умови) ГОСТ 11773-76 Натрий фосфорнокислый двузамещенный. Технические условия (Натрій фосфорнокислий двозаміщений. Технічні умови) ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия (Папір фільтрувальний лабораторний. Технічні умови) ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия (Пептон сухий ферментативний для бактеріологічних цілей) ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия (Агар мікробіологічний. Технічні умови) ГОСТ 20292-74 Приборы мерные лабораторные стеклянные. Бюретки, пипетки. Технические условия (Прилади мірні лабораторні скляні. Бюретки, піпетки. Технічні умови) ГОСТ 22180-76 Реактивы. Кислота щавелевая. Технические условия (Реактиви. Кислота щавлева. Технічні умови) ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия (Реактиви. Ефіри етиловий та бутиловий оцтової кислоти. Технічні умови) ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные.
Типы, основные параметры и размеры (Посуд і обладнання лабораторні скляні. Типи, основні параметри і розміри) ГОСТ 27068-86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия (Реактиви. Натрій сіркуватистий (натрію тіосульфат) 5-водний. Технічні умови) ГОСТ 30364.0-97 Продукты яичные. Методы отбора проб и органолептического анализа (Продукти яєчні. Методи відбору проб і органолептичного аналізу.) ДСТУ
3 ТЕРМІНИ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ПОНЯТЬ
У цьому стандарті використано терміни та визначення, установлені ДСТУ 2636 та [1].4 ВІДБИРАННЯ І ГОТУВАННЯ ПРОБ
4.1 Проби для мікробіологічних аналізів сухих та рідких яєчних продуктів відбирають згідно з ГОСТ 30364.0. Для аналізування цілих яєць відбирають 10 штук.
4.2 Із об’єднаної проби відбирають 100 см3 рідких яєчних продуктів або 100 г сухих.
4.3 Цілі яйця звільняють від шкаралупи, відділяють жовтки від білків, змішують їх.
4.4 Готування проб 4.4.1 Для готування проб використовують:
- ізотонічний розчин хлористого натрію, приготований згідно з А.6 Додатку А цього стандарту;
- колби місткістю 250 см3 згідно з ГОСТ 1770;
- піпетки згідно з ГОСТ 20292;
- пробірки скляні згідно з ГОСТ 253
- вода дистильована згідно з ГОСТ 6709.
4.4.2 Для готування початкового розведення у колбу місткістю 250 см3 10 см3 рідкого або 10 г сухого яєчного продукту, відібраного з вносять об’єднаної проби, додають 90 см3 дистильованої води або стерильного ізотонічного розчину. Суміш збовтують (або перемішують) протягом часу від 1 хв. до 2 хв. стерильною піпеткою. Отримують розведення 1:10.
4.4.3 Для готування серій послідовних розведень 1см3 суміші початкового розведення переносять стерильною піпеткою у пробірку і додають 9 см3 стерильної рідини (води або ізотонічного розчину) так, щоб піпетка не торкалася поверхні рідини. Внесену суміш ретельно перемішують іншою стерильною піпеткою шляхом наповнення і виштовхування вмісту не менше ніж 10 разів; отримують розведення 1:100.
8 ДСТУ 4.4.4 Аналогічним способом готують наступні розведення: до 1:1000 для сухих і до 1:10000 для рідких яєчних продуктів і вмісту цілих яєць.
4.4.5 Тривалість часу з моменту закінчення готування останнього розведення до початку висівання не повинен перевищувати 20 хв.
4.5 Під час відбирання та готування проб треба дотримуватися умов, що виключають вторинне мікробне забруднювання.
4.6 Готування лабораторного посуду, інструментів і матеріалів 4.6.1 Лабораторний посуд миють в окремому приміщенні, застосовуючи щітки, йоржі у поєднанні з миючими розчинами напіврідкого мила, мильного розчину, пральними порошками, дозволеними для миття лабораторного посуду. Канали піпеток, що закупорилися, прочищають тонким дротом. Для видалення зі скла нальоту білого кольору, посуд поміщають у (5-10) % розчин соляної кислоти на (30-40) хв. Після миття посуд споліскують водопровідною водою та двічі дистильованою.
Вимитий посуд не витирають, а висушують за кімнатної температури або гарячим повітрям у сушильній шафі за температури (103±2) оС. Флакони, пробірки, колби, бутилі закривають ватно-марлевими корками, зверху яких одягають паперові ковпачки і обв’язують шпагатом. Чашки Петрі по (3-6) штук загортають у цупкий папір для обгортання, пергамент, підпергамент. У верхню частину градуйованих і пастерівських піпеток уставляють шматочок вати.
Потім їх загортають у папір і останню підписують, вказуючи об’єм загорнутих піпеток.
4.6.2 Лабораторний посуд стерилізують сухим жаром за температури (160±3) оС протягом (150±5) хв. або в автоклаві за температури (121±1) оС протягом (20-30) хв.
4.6.3 Інструменти та матеріали стерилізують згідно з ДСТУ ISO 13683.
4.7 Поживні середовища, фарби та реактиви готують згідно з Додатком А.
ДСТУ
5 МЕТОДИ ДОСЛІДЖУВАННЯ
5.1 ВИЗНАЧАННЯ КІЛЬКОСТІ МЕЗОФІЛЬНИХ АЕРОБНИХ І
ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЕРОБНИХ МІКРООРГАНІЗМІВ
Метод засновано на підрахуванні усіх колоній мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів, що виростають на щільному поживному агарі, і перерахування їхньої кількості на 1 г сухого (1 см3 рідкого) яєчного продукту.5.1.1 Засоби та допоміжні пристрої:
- чашки Петрі згідно з ГОСТ 25336;
- м'ясо-пептонний агар згідно з А.4 Додатку А цього стандарту;
- термостат електричний для вирощування мікроорганізмів з до 55 оС з автоматичним терморегулятором, що забезпечує температуру точністю ±0,2 оС, згідно з чинними нормативними документами;
- лупа зі збільшенням (2-10)х згідно з чинними нормативними документами;
- прилад для підрахування колоній бактерій ПСБ;
- олівець для скла.
5.1.2 Методика та правила проведення досліджування По 1 см3 досліджуваного продукту з розведень, що приготовані згідно з 4.4, висівають паралельно у дві чашки Петрі для кожного розведення. Під час посівів кришку чашки Петрі ледь відкривають і посівний матеріал вносять на дно чашки. Не пізніше ніж через 15 хв. після внесення досліджуваного матеріалу у чашки його заливають (15-20) см3 попередньо розтопленого і охолодженого до температури (45±1) оС поживного або м'ясо-пептонного агару. Чашки з посівами, які залиті поживним середовищем, обережно обертають так, щоб посівний матеріал рівномірно розподілявся по усій поверхні поживного середовища. Чашки з посівами перевертають догори дном та інкубують у термостаті за температури (30±1) оС протягом (72±3) год.
5.1.3 Опрацювання результатів Результати оцінюють по кожній пробі окремо.
Підрахунок мікроорганізмів ДСТУ Для підрахунку кількості мікроорганізмів враховують усі колонії, що виросли, помічаючи олівцем для скла на дні чашки. Підрахунок одиниць, які утворюють колонії (КУО), проводять неозброєним оком або за допомогою лупи чи приладом, спеціально призначеним для підрахування колоній.
Колонії підраховують на посівах того розведення, де їхня кількість знаходиться у межах від 30 до 300. За результатами підрахування обчислюють середнє арифметичне значення числа колоній із усіх посівів одного розведення.
Якщо виявлено від 30 до 300 колоній у посівах не одного, а двох послідовних розведень, то підраховують і обчислюють середню арифметичну кількість мікроорганізмів у кожному з цих розведень окремо. Якщо отримані результати відрізняються один від одного більше ніж у 2 рази, то оцінку проводять за результатами посіву найбільшого розведення.
Отримані результати округлюють таким чином:
- якщо інкубовані чашки не містять колоній, то результат виражають так: менше ніж 1,0 х 10 мікроорганізмів в 1 см3 або 1 г продукту;
- якщо у чашках з розведенням 1:10 виросло менше ніж 30 колоній, то результат виражають так: менше ніж 3,0 х 10;
- якщо кількість колоній, що виросли, менше ніж 100, його округлюють до найближчого числа, кратного 5;
«